การแยกดีเอ็นเอโดยใช้เครื่อง Centrifuge
การแยกดีเอ็นเอ (DNA Extraction) เป็นกระบวนการสำคัญในงานวิจัยทางชีววิทยาและชีวโมเลกุล ซึ่งใช้ในการศึกษาโครงสร้างของยีน การตรวจวินิจฉัยทางการแพทย์ และการพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ เครื่องหมุนเหวี่ยง (Centrifuge) เป็นอุปกรณ์หลักที่ช่วยให้สามารถแยกดีเอ็นเอออกจากสารละลายและสิ่งเจือปนอื่นๆ ได้อย่างมีประสิทธิภาพ
หลักการของการแยกดีเอ็นเอโดยใช้ Centrifuge
การแยกดีเอ็นเออาศัยกระบวนการตกตะกอนและการแยกชั้นของสารละลายที่มีองค์ประกอบแตกต่างกัน โดยใช้แรงเหวี่ยงหนีศูนย์กลางเพื่อทำให้ดีเอ็นเอที่ละลายอยู่ในสารละลายแยกออกเป็นตะกอนที่สามารถนำไปวิเคราะห์หรือใช้งานต่อได้
ขั้นตอนการแยกดีเอ็นเอโดยใช้ Centrifuge
1. การเตรียมตัวอย่าง
- เก็บตัวอย่างที่มีดีเอ็นเอ เช่น เซลล์จากเนื้อเยื่อ เลือด หรือจุลินทรีย์
- ทำให้เซลล์แตกตัว (Cell Lysis) โดยใช้สารทำลายเยื่อหุ้มเซลล์ เช่น SDS หรือ Triton X-100
2. การกำจัดโปรตีนและสิ่งเจือปน
- เติมสารฟีนอล-คลอโรฟอร์ม (Phenol-Chloroform) เพื่อสลายโปรตีนและแยกออกจากดีเอ็นเอ
- ปั่นเหวี่ยงที่ 12,000-15,000 × g เป็นเวลา 10-15 นาที ทำให้เกิดการแยกชั้นระหว่าง
- ชั้นบน: DNA ที่ละลายในสารละลาย
- ชั้นกลาง: โปรตีนและสิ่งเจือปน
- ชั้นล่าง: ฟีนอลและคลอโรฟอร์ม
3. การตกตะกอนของดีเอ็นเอ (DNA Precipitation)
- เติมเอทานอลเย็น 100% หรือไอโซโพรพานอล (Isopropanol) เพื่อช่วยให้ดีเอ็นเอตกตะกอน
- ปั่นเหวี่ยงที่ 10,000-12,000 × g เป็นเวลา 10 นาที
- ดีเอ็นเอจะปรากฏเป็นตะกอนสีขาวที่ก้นหลอด
4. การล้างและละลายดีเอ็นเอ
- ล้างตะกอนดีเอ็นเอด้วยแอลกอฮอล์ 70% เพื่อล้างเกลือออก
- ปั่นเหวี่ยงอีกครั้งที่ 7,500 × g เป็นเวลา 5 นาที แล้วเทของเหลวส่วนเกินออก
- ทำให้ดีเอ็นเอแห้ง แล้วละลายในบัฟเฟอร์ TE หรือ น้ำปราศจากนิวเคลส (Nuclease-free water)
ประเภทของ Centrifuge ที่ใช้ในการแยกดีเอ็นเอ
- Microcentrifuge: ใช้สำหรับตัวอย่างปริมาณน้อย เช่น 1.5-2 mL
- High-speed centrifuge: ใช้สำหรับตัวอย่างปริมาณมาก เช่น 50 mL
- Ultracentrifuge: ใช้ในกรณีที่ต้องการแยกดีเอ็นเอที่มีความบริสุทธิ์สูง
การประยุกต์ใช้การแยกดีเอ็นเอ
- การตรวจวิเคราะห์ทางการแพทย์ เช่น การวินิจฉัยโรคทางพันธุกรรม
- การศึกษาทางพันธุศาสตร์และจีโนมิกส์
- การพัฒนาเทคโนโลยีชีวภาพ เช่น CRISPR และ PCR
สรุป
การแยกดีเอ็นเอโดยใช้เครื่อง Centrifuge เป็นกระบวนการสำคัญที่ช่วยให้ได้ดีเอ็นเอที่บริสุทธิ์สำหรับการศึกษาทางชีววิทยา เทคนิคที่เหมาะสมและการใช้ Centrifuge อย่างถูกต้องช่วยให้การแยกดีเอ็นเอมีประสิทธิภาพและแม่นยำมากขึ้น
หากต้องการข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับ การแยกดีเอ็นเอโดยใช้เครื่อง Centrifuge สามารถสอบถามได้ !
สนใจสินค้าติดต่อ
บริษัท แอ๊กโซ เคมิคอลส์ แอนด์ เซอร์วิสเซส จำกัด
โทร 02 346 9239 ต่อ 11 หรือ Line @axxochem
www.axxo.co.th หรือ sales_chem@axxo.co.th